内毒素检测方法那么多，你的酶标仪选对了吗？

基本原理：

凝胶法基于鲎试剂与内毒素反应后形成凝胶的原理。
药典判定标准：将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180°，若管内形成凝胶，并且凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性；未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为阴性。

酶标仪需求： 不需要酶标仪，但需要37℃恒温设备。

该方法通常依靠目测观察试管底部凝胶是否形成，属于定性或半定量检测。部分实验室会用普通酶标仪读取浊度辅助判断，但这并非主流结果判定方法，也不符合药典规定。

✅ 特点：操作简单、成本低，但主观性强，数据完整性欠缺。

基本原理：

利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。浊度法通过检测反应液浊度变化（通常为340–405 nm）来定量内毒素浓度，可分为终点浊度法和动态浊度法。

酶标仪要求：

• 光吸收模块

• 波长范围包含 340nm/405 nm（视试剂盒说明而定）

• 恒温功能（37 ± 0.5℃），且需覆盖整个动力学检测过程

• 动态浊度法要求酶标仪能进行动力学读数

✅ 特点：定量准确、通量高，但要求酶标仪温控稳定且动力学性能好。

基本原理：

利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物释放出呈色团的多少而测定内毒素含量的方法，在405nm处测定吸光度。可分为终点显色法和动态显色法。

酶标仪要求：

• 光吸收模块，波长覆盖405nm（视试剂盒说明而定）

• 恒温功能（37℃ ± 0.5℃），动态显色法同样需要全程温控

• 动态显色法需动力学读数能力

✅ 特点：灵敏度高、定量范围宽，是目前主流的定量内毒素检测方法。

对酶标仪的基本要求与浊度法相似，但更关注405 nm波长的准确性与温控均匀性。

基本原理：

重组 C因子（rFC）是人工合成的C因子，而C因子是鲎试剂中对内毒素敏感的蛋白，rFC与内毒素接触后，会发生蛋白结构的改变，可与荧光底物作用产生与内毒素浓度成比例的荧光信号。用荧光酶标仪测量反应体系的荧光强度，并与已知浓度的内毒素标准品建立的标准曲线进行比较，就可以计算出样品中内毒素的精确含量。

关键点： 目前主流品牌rFC试剂需用荧光酶标仪检测。

酶标仪要求：

• 具备荧光模块

• 配备合适的激发/发射滤光片（激发波长 380 nm / 发射波长 440 nm，视试剂盒说明而定）

• 恒温功能（37℃±0.5℃） 同样必要，反应需在恒温下进行

• 软件符合法规要求（如FDA 21 CFR Part 11）

✅ 重组C因子法特点：

• 无动物源成分、批间一致性高，结果更加稳定可靠；

• 避免样品中β-葡聚糖对内毒素检测的干扰，避免假阳性；

• 不再需要活体鲎中提取的血液，保护鲎资源，维护生态环境可持续发展。

* 但必须使用荧光酶标仪，普通光吸收酶标仪无法替代。