色谱系统正反相切换核心要点
2026/07/13
高效液相色谱（HPLC）分为正相色谱与反相色谱两大核心体系，二者在固定相极性、流动相组成上完全相反，是有机化合物分离分析的核心模式。在方法开发、日常检测中，根据样品性质切换正反相分离模式十分常见，但在仪器适配性、正反相溶剂体系互溶性、色谱柱适配性上，二者存在较大差异，盲目切换极易造成仪器损伤、管路堵塞、色谱柱报废及相关图谱异常等问题。关于正反相切换要点，今天一文讲清。
一、正反相差异
01作用原理
正相色谱固定相极性>流动相极性，适用于亲水性较强（反相无保留）或疏水性较强样品（反相保留太强）。
反相色谱固定相极性，其条件温和，普适性更好，可操作空间高，是方法开发shou选。
02固定相差异
正相色谱常用极性官能团填料色谱柱，eg：Silica、NH2、CN等。
反向色谱常用疏水性官能团及其改性基团作为填料，eg：C18、C8、C4、Phenyl、PFP等。
03流动相差异
反向色谱常用水相+极性有机溶剂进行洗脱，并调节洗脱强度，有机溶剂比例越大，洗脱能力越强。
正相色谱均使用有机溶剂进行洗脱，常以非极性溶剂为基础，通过加入极性溶剂来调节洗脱强度，极性溶剂比例越大，洗脱能力越强。
04仪器系统
正相、反相可共用同一套仪器，但在设备材质上有不同要求。
正相色谱因需长时间接触较多的有机溶剂，管路、密封圈等材质，均需能耐受纯有机溶剂，以确保系统的密封性能及正常的流动相运输。
二、正反相切换流程
正反相切换的核心在于规避两种系统在仪器硬件、溶剂互溶、色谱柱使用条件上的兼容性，以规避仪器、色谱柱堵塞和损坏的情况。如：正相系统要求系统完全无水，正己烷与甲醇不互溶，正相溶剂易使仪器内配件发生溶胀、腐蚀，从而影响输送等。
01反相切换正相
10%甲醇/乙jing水冲洗系统，除盐；（10-20倍柱体积）
甲醇/乙jing冲洗，保存反相色谱柱；（10-20倍柱体积）
拆卸色谱柱，接双通，切换为纯异丙醇冲洗，作为过渡溶剂，同时除系统的水；（异丙醇粘度高，该步骤通常低流速进行，同时，为有效去除系统原有溶剂及水，该步骤需长时间冲洗）
切换为正己烷，冲洗系统。
连接正相色谱柱，以正己烷/流动相进行平衡。
操作过程，注意多个通道管路需同样进行溶剂替换处理，排空体系内的水，切换为正相系统。
02正相切换反相
正相切换反相核心在于使用过渡溶剂冲洗，避免体系的不互溶导致堵塞。
正己烷冲洗系统；（10-20倍柱体积）；
拆卸色谱柱后，接双通，切换为纯异丙醇冲洗；（多通道均置换系统内的正己烷，常规流速下，每个通道3-5min即可）；
10%甲醇/乙jing水冲洗系统；（置换为反相体系）
安装反相色谱柱，10%甲醇/乙jing水冲洗后，使用流动相平衡。
END
关于康成百澳生物
生命科学领域快速消费品及配套服务的专业供应商，总部位于泰州医药城，上海、广州、南京、重庆、成都、苏州、杭州、武汉、济南等地设有分公司及办事处。
产品线涵盖精准医疗、抗体、疫苗、CGT、分子生物学与细胞生物学、常规临床检验、药物筛选、基因组学与蛋白质组学等研究和应用领域，以“技术+产品+服务”的一体化模式服务客户。
部分图片、字体、文字来源于网络 如有侵权请联系删除
