产品推荐｜NEB T7核酸外切酶（#M0263）
2026/07/30
产品信息
T7核酸外切酶（T7Exonuclease，NEB #M0263）是双链DNA特异性5'→3'核酸外切酶，可从线性双链DNA、带缺口环状双链DNA的5'端逐步水解核苷酸，不降解超螺旋质粒与游离单链DNA；酶促反应温和可控，支持部分消化，是分子克隆中定点突变去除野生型模板、制备单链DNA模板、纯化环状重组质粒的核心工具酶。
图：来源于NEB官网
表达来源：重组工程菌大肠杆菌表达，TYB12内含肽融合纯化，蛋白纯度高、酶活批次稳定
规格参数：
50μL标准反应体系：
1. DNA：最高 1 μg
2. 10×NEBuffer 4：5 μL（终浓度 1×）
3. T7 Exonuclease：1 μL（10 U）
4. 无核酸酶水：补足至 50 μL
5. 孵育条件25 ℃恒温孵育30min
6. 终止方式 加入EDTA，使体系终浓度≥11 mM 终止酶促反应
7. 产物纯化可选方案（三选一）
① 柱纯化：Monarch® Spin PCR & DNA 纯化试剂盒（#T1130）
② 琼脂糖凝胶电泳分离 + 胶回收：Monarch 凝胶 DNA 提取试剂盒（#T1120）
③ 苯酚 / 氯仿抽提 + 乙醇沉淀1×NEBuffer™4 缓冲液，25℃恒温孵育；
核心酶活特性：
1. 严格双链DNA特异性5'→3'外切酶：仅识别线性双链、带缺口 / 切刻环状双链DNA，从5'端持续降解；完全不切割超螺旋质粒
2. 无单链DNA内切酶活性，不会降解游离 ssDNA；硫代磷酸酯（PT）修饰可阻断酶切，可控实现部分消化
T7外切酶适用于:
• 等位点定向诱变
• 空间位点延伸
核心优势
▶ 底物专一性强，只降解线性 / 缺口双链，完整保留超螺旋载体
仅作用于线性双链、切口环状DNA，超螺旋质粒全程不受影响，处理质粒、突变模板时不会破坏目标环状载体，大幅降低实验损耗，减少模板浪费。
▶ 25℃温和反应，可控部分消化，适配定点突变核心流程
区别于多数外切酶37℃高温反应，T7外切酶最优孵育温度为25℃，反应速率平缓；梯度酶量可精准控制末端消化长度，是Q5®定点突变试剂盒标配配套酶，高效去除未突变线性模板，显著提升突变阳性率。
▶ PT 修饰可控阻断酶切，精准构建单链模板
DNA 5'端添加连续硫代磷酸酯键，可阻挡90%以上酶切降解，仅对互补链进行消化，快速制备定向单链DNA模板，用于探针合成、文库构建、链特异性扩增。
▶ 多功能适配缺口延伸、连接产物纯化
可对质粒切口位点进行5'端消化延伸；连接反应后消化未环化线性片段，纯化环状重组质粒，省去多次胶回收步骤，缩短载体构建周期。
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