免疫实验选型指南｜告别名词混淆，少走90%弯路
2026/01/30
做免疫实验总被各类技术名词绕晕？不知道该选哪种技术？ 免疫组化、免疫荧光、免疫细胞化学、多重免疫组化……明明核心原理都是抗原抗体特异性结合，却对应不同样本、场景和操作，选错不仅白费功夫，还会耽误实验进度。 今天整理了保姆级免疫实验指南，从定义、适用场景到避坑技巧，一篇帮你理清四大技术的核心差异，精准匹配实验需求，少走90%弯路！ 一、四大技术核心定义 其实这四项技术的核心逻辑一致，均基于「抗原抗体特异性结合」，差异主要体现在「样本类型」「信号检测方式」和「标数能力」，分清这三点就不会乱。 1. 免疫组化（Immunohistochemistry, IHC） ✅ 适用样本：石蜡组织切片、冰冻组织切片（如肿瘤组织、脏器组织等） ✅ 信号检测：DAB显色（棕黄色阳性信号），普通光学显微镜即可观察 ✅ 核心用途：临床病理诊断、组织内抗原定位与表达强度分析（如肿瘤标志物筛查） 优势：操作简单、成本低、切片可长期保存，稳定性拉满； 局限：仅支持单标，易受内源性过氧化物酶干扰。 2. 免疫荧光（Immunofluorescence, IF） 根据样本类型分为两类： 组织荧光（Immunohistochemistry-Immunofluorescence, IHC-IF）：适配组织切片，解决组织双标共定位需求； 细胞荧光（Immunocytochemistry-Immunofluorescence, ICC-IF）：适配细胞样本，精准定位亚细胞结构。 ✅ 信号检测：荧光素标记抗体（常见绿/红/蓝三色），需荧光显微镜或激光共聚焦 ✅ 核心用途：单/双标共定位分析、抗原精准定量（无内源性酶干扰） 优势：背景低、定位准，支持多标组合； 局限：荧光易淬灭，全程需避光，封片后24h内必须完成成像。 3. 免疫细胞化学（Immunocytochemistry, ICC） ✅ 适用样本：贴壁细胞爬片、悬浮细胞滴片（如肿瘤细胞系、原代细胞） ✅ 常用体系：优先搭配IF荧光体系（背景干净、定位精准），极少用显色体系 ✅ 核心用途：蛋白亚细胞定位（胞核/胞质/细胞膜）、细胞水平机制验证 优势：样本制备简单、易重复，新手友好度极高； 局限：无组织空间结构，无法反映体内微环境状态。 4.多重免疫组化（Multiplex Immunohistochemistry, mIHC） ✅ 核心技术：酪胺信号放大技术（TSA），可放大弱表达抗原信号，避免多标串色； ✅ 适用样本：石蜡/冰冻组织切片（石蜡切片适配性更强）； ✅ 核心用途：肿瘤微环境分析、多蛋白互作研究、免疫细胞浸润定位； 优势：一次实验获取多维度数据，节省珍贵临床样本，减少样本间误差； 局限：成本高、操作流程复杂，对抗体组合和设备要求较高，适合有基础后尝试。 多重免疫组织化学实验 —Ki67 抗体 [SP6]（货号 AB16667）相关检测
二、实验选择对照表
三、高频避坑技巧 荧光类实验（免疫荧光IF/组织荧光IHC-IF/多重免疫组化mIHC） 从二抗孵育开始必须「全程避光」，封片时一定要用抗淬灭封片液，否则荧光信号会快速淬灭，甚至无法成像 抗原修复（免疫组化IHC/多重免疫组化mIHC关键步骤） 石蜡切片高温修复后，务必「自然冷却至室温」，严禁用水冷！否则抗原表位会重新折叠，直接导致实验无阳性信号 免疫细胞化学（ICC）细胞爬片操作 爬片必须用多聚赖氨酸包被（防脱片），洗涤时沿培养孔壁缓慢加液，切勿晃动培养板，否则细胞会大面积脱落，实验直接作废 多重免疫组化（mIHC）多标抗体组合 一抗优先选择「兔/鼠/山羊」不同种属来源，避免二抗交叉反应；荧光素选光谱无重叠组合，减少串色
做免疫实验，试剂品质直接决定实验结果，尤其是一抗和二抗的特异性，选错试剂容易导致假阳性、背景高、无信号等问题。江苏康成百澳作为abcam一级代理，可一站式提供正品abcam一抗、荧光二抗、多重免疫组化专用试剂盒及配套耗材，同时还能提供专业技术支持，如新手不懂的抗体组合、稀释比例、操作细节，都能获得针对性指导，大幅降低实验失败率，科研党可放心冲！
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