技术干货 | 关于Alexa Fluor®偶联抗体那些你不知道的事儿~

 2026/02/27

在荧光检测技术蓬勃发展的今天，Alexa Fluor^®系列染料已成为生命科学研究领域不可或缺的重要工具。无论你是刚接触荧光显微镜的新手，还是经验丰富的流式细胞术专家，Alexa Fluor^®偶联抗体都值得你深入了解。今天，我们就来聊聊关于Alexa Fluor^®偶联抗体那些你可能还不知道的事儿~

Alexa Fluor^®染料的概述

Alexa Fluor^®染料是一系列高亮度、高光稳定性的荧光染料，因其卓越的性能，被广泛应用于荧光显微镜、流式细胞术等生物医学研究领域。

开发背景:

Alexa Fluor^®染料由Molecular Probes公司的创始人Richard和Rosaria Haugland及其团队在20世纪90年代开发。其初衷是为了解决传统荧光染料（如荧光素FITC和罗丹明）光稳定性差、易受酸碱度影响等问题。

命名由来:

该系列染料以创始人之一Dick Haugland的儿子Alex Haugland的名字命名。

化学特性:

Alexa Fluor^®染料的卓越性能源于其独特的化学设计：它通过对香豆素、氧杂蒽（如荧光素、罗丹明）、青色素等传统染料骨架进行化学修饰，特别是引入了磺酸酯基团，使其带负电并具有很强的亲水性。

Alexa Fluor^®染料为什么是荧光实验的“香饽饽”？

核心优势

1. 明亮的荧光信号

Alexa Fluor^®染料的荧光强度显著优于光谱范围相似的其他染料，能够提供更强、更清晰的信号输出。

2. 超高光稳定性

卓越的光稳定性使样品在更长时间的观察和图像采集中保持稳定的荧光表现，确保获得清晰一致的成像结果。

3. 宽泛的pH耐受性

不同实验的缓冲体系pH差异很大，不少染料对pH特别敏感，稍微偏酸偏碱荧光强度就“跳水”。而Alexa Fluor^®在pH 4.0-10.0的宽广范围内都能保持较高水平的荧光强度，最佳适用pH为6.5-8.5，适用于多种实验条件。

4. 丰富的颜色选择

做多色荧光实验最头疼的就是染料波长撞车，Alexa Fluor^®系列提供了多种波长的选择，从近紫外、可见光到近红外区间都有覆盖，轻松实现多重标记与多重检测，多色共标实验也能安排得明明白白。

ab190565（Alexa Fluor^®647 Anti-NeuN 抗体 [EPR12763] - Neuronal Marker ）Immunohistochemistry(Frozen sections)验证结果图

主要应用

Alexa Fluor^®染料通过其活泼基团（如NHS酯）与抗体、蛋白、多肽、核酸等生物分子偶联，用于特异性标记和检测。以下是其主要的应用领域：

关于Alexa Fluor^®染料，大家问得最多的3个问题

Q1：Alexa Fluor^®染料凭啥比其他荧光基团更好用？

这是因为Alexa Fluor^®染料在设计之初就针对亮度和稳定性做了专门优化，能产生更亮、更稳定的荧光发射，不管是荧光成像还是流式分析，都能显著提升结果质量，让你的观察更精确、荧光信号更持久。

Q2：Alexa Fluor ^®偶联抗体可以用来做活细胞成像吗？

当然可以，不过需要注意的是，不同抗体的靶标和特性不同，不是所有Alexa Fluor^®偶联抗体都适合活细胞成像。大家在购买前一定要仔细查看产品规格，确认是否兼容活细胞应用，避免踩坑。

Q3：这些偶联抗体适合做高通量筛选吗？

适合！Alexa Fluor^®偶联物具有高亮度和高稳定性的特点，可以很好的匹配高通量实验的需求，能实现快速、可靠的信号输出，是高通量实验应用的理想选择。

熟读Abcam官方指南，用对Alexa Fluor^®偶联抗体，实验成功率翻倍

根据Abcam官方给出的Alexa Fluor^®偶联抗体使用注意事项，我们整理了从储存到实验操作全流程的注意事项，照着做就能少走很多弯路：

储存环节，这些细节别忽略

1. 储存温度怎么选？

4℃下可储存一至两周。收到抗体后，短暂离心抗体管，以混匀溶液并分装二抗溶液。分装抗体应在 -20℃或 -80℃下储存。

2. 为什么一定要分装抗体？

分装可以最大限度地减少抗体被污染的可能性，而且可以防止抗体因反复冻融而发生降解。建议分装量不少于10µL，防止因抗体蒸发和吸附到小瓶表面而影响储备液浓度。

3. 分装的样本怎么存才对？

分装试样应在 -20℃或 -80℃下避光储存在低蛋白结合管中。长时间暴露在光下会导致荧光基团发生光漂白，从而降低抗体活性。

4. 储存前可以稀释抗体吗？

如果需要稀释，最好用抗体运输时的缓冲液（通常是含0.02%diedan化钠、1% BSA、30%甘油的PBS），用PBS稀释也可以。不过更建议以浓缩形式储存抗体，过度稀释可能会影响抗体的稳定性，用的时候再稀释效果更好。

实验操作，这些技巧能帮你少踩坑

1. 封闭液选哪种最好？

最准确的方法是查看官网的产品说明书，里面会指明最适合你实验的封闭液，而且封闭液一定要每次使用前新鲜配制，避免失效。

1. 孵育样本时，抗体用什么溶液稀释？

孵育样本时，在封闭缓冲液中稀释抗体有助于最大限度地减少背景。也可以用不含封闭剂的抗体溶液（如 TBST，含吐温^®20 的Tris缓冲盐溶液）孵育样本。结果可能会有所不同，但是如果背景不重要，那么建议在低浓度封闭缓冲液中稀释抗体。

2. 样本孵育多久合适？

孵育时间主要看你目标蛋白的表达情况，通常来说，WB和IF/ICC实验中，孵育1个小时就可以实现有效检测。

3. 孵育的时候需要避光吗？

必须要！用Alexa Fluor^®偶联二抗孵育样本的全程都要避光，长时间暴露在光下会导致染料发生光漂白，直接影响偶联二抗的性能。

4. 孵育温度怎么选？

孵育温度和你选择的孵育时间是匹配的：如果选择短时间孵育（比如1小时），可以放在37℃；如果是过夜孵育，建议放在4℃。

5. 抗体的最佳稀释度怎么确定？

不同的应用、实验条件、靶点，适合的抗体稀释度差异很大。新手可以先按照比一抗高十倍的稀释度来稀释二抗，不过最准确的方法是通过连续稀释二抗制作滴定曲线来确定最佳稀释度，滴定的时候要尽量和你后续实验的条件保持一致，结果才更有参考价值。

6. 怎么才能最大限度减少非特异背景？

其他类似染料相比，Alexa Fluor^®偶联二抗的荧光强度更强，能够更好地放大信号。二抗通常在样本孵育期间用封闭缓冲液稀释，以最大限度地减少非特异性结合。以最佳稀释度稀释二抗也有助于最大限度地减少背景。用抗体孵育样本后，务必充分洗涤样本。需要注意的是，长时间孵育（例如过夜孵育）可能会导致背景增加。

7. 用过的二抗溶液可以回收再用吗？

为了得到zui好的实验结果，我们不建议重复使用Alexa Fluor^®偶联二抗。每次使用后二抗的有效浓度都会下降，如果实在想要重复使用，一定要补充新鲜的抗体进去。

Alexa Fluor^®偶联二抗适合做多色成像吗？

适合！Abcam的Alexa Fluor^®偶联二抗都经过了充分的验证，特异性和灵敏度都有保障，而且涵盖的种属、靶标非常广泛，完全能满足多重成像的需求。